| รวบรวมและเรียบเรียงโดย : The LittleOil |
การตรวจวัดปริมาณดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิต
การศึกษาเกี่ยวกับพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิต สามารถศึกษาได้เป็นหลายแนวทาง
อาทิเช่น การศึกษาการแสดงออกของยีน ในสิ่งมีชีวิต การทำโคลนนิ่ง (Cloning)
ตลอดจนการประยุกต์ด้วยการนำยีนจากสิ่งมีชีวิตหนึ่ง ไปใส่ในสิ่งมีชีวิตหนึ่ง
(genetic engineering) หรือการทำ GMO (Genetically Modify Organism)
การศึกษาวิจัยเหล่านี้ เริ่มต้นจากการสกัดดีเอ็นเอออกจากเนื้อเยื่อ
หรือเซลล์ ก่อนเป็นอันดับแรก
ในการสกัดดีเอ็นเอ ซึ่งอยู่ในนิวเคลียสของสิ่งมีชีวิต ประกอบด้วยขั้นตอนมากมาย
เพื่อแยกดีเอ็นเอออกมาจาก โปรตีน และสารอื่น ๆ ที่ประกอบอยู่ในเซลล์
ดีเอ็นเอที่ได้จากการสกัดควรนำไปตรวจสอบปริมาณดีเอ็นเอ (DNA quantity)
และความบริสุทธิของดีเอ็นเอ (DNA Purity) โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตรมิเตอร์
ก่อนนำไปใช้งานต่อไป โดยเฉพาะอย่างยิ่งงานทางด้านโคลนนิ่ง
การตรวจวัดปริมาณดีเอ็นเอ (DNA Quantification)
การตรวจวัดปริมาณดีเอ็นเอโดยการใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตรมิเตอร์ วัดสารละลายดีเอ็นเอที่ความยาวคลื่น
260 nm โดยทั่วไปความเข้มข้นของ Double strand DNA 50 ug/ml จะดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น
260 nm (A260) = 1 หรืออาจจะนำสารละลายดีเอ็นเอมาตรฐานที่ทราบความเข้มข้นมาทำ
standard curve เพื่อใช้ในการหาปริมาณดีเอ็นเอ ที่ต้องการ
ตัวอย่างสเปกตรัมที่ได้จากการวัดปริมาณดีเอ็นเอด้วย UV Biospec-1601
การตรวจความบริสุทธิของดีเอ็นเอ (DNA
purity)
การตรวจความบริสุทธิของดีเอ็นเอ ซึ่งจำเป็นต้องทราบค่าก่อนทำโคลนนิ่ง
หรือทำงานทางด้านพันธุวิศวกรรม สามารถหาได้จากค่า การดูดกลืนแสง A260
/ A280 หรือใช้ Option ซึ่งจะวัดค่าการดูดกลืนแสงของดีเอ็นเอ
(A260) และ โปรตีน (A280) จากนั้นโปรแกรมจะคำนวนค่าความบริสุทธิของดีเอ็นเอให้
ค่าความบริสุทธิของดีเอ็นเอ ควรมีค่าอยู่ไม่ต่ำกว่า 1.8-1.9 ซึ่งถ้าต่ำกว่านี้แสดงว่ามีการปนเปื้อนของโปรตีนสูง
ซึ่งอาจต้องนำดีเอ็นเอนี้ไปทำ purify ซ้ำอีกครั้ง
|
DNA Quantification and DNA Purity
Bara Scientific 
