Vitamin Analysis
การวิเคราะห์ Vitamin สามารถทำได้หลายวิธี และเลือกเครื่องมือในการวิเคราะห์ได้หลายอย่างให้เหมาะสมกับลักษณะของตัวอย่าง
และคุณสมบัติของ Vitamin ว่าเป็นชนิดละลายน้ำ หรือละลายในไขมันเนื่องจาก
Vitamin เป็นสารกลุ่มที่สามารถดูดกลืนแสงได้เป็นอย่างดี ดังนั้นการวิเคราะห์มักจะต้องเกี่ยวข้องกับเครื่อง
spectrophotometer ไม่ว่าจะเป็น UV spectrophotometer หรือ fluorescence
photometry (RF) การเลือกใช้นอกจากจะขึ้นอยู่กับชนิดของ vitamin ยังต้องคำนึงปริมาณของปริมาณสารที่ต้องการวิเคราะห์
ในการวิเคราะห์บางครั้งก็ต้องมีการทำปฏิกิริยาก่อนทำการวิเคราะห์ เพื่อเพิ่ม
sensitivity ในการวัด หรือบางครั้งก็เพื่อให้เกิดความคงตัว ก่อนทำการวิเคราะห์
ส่วนในกรณีทีเป็นสารผสม HPLC มักจะเป็นวิธีที่ถูกเลือกมาใช้ในการวิเคราะห์
ตัวอย่างแรกจะเป็นการวิเคราะห์ Vitamin C ในลูกกวาดด้วยเครื่อง
UV Spectrophotometer
การวิเคราะห์เริ่มต้นจากการละลาย Vitamin C ในลูกกวาดด้วย metaphosphoric
acid จากนั้นนำ Reducing vitamin C ที่ได้ไปทำปฏิกิริยากับ 2, 4- Dinitrophenylhydrazine
ได้ product เป็น Oxidized vitamin C กับ red osazone ซึ่งสามารถละลายได้ใน
85% sulfuric acid ก่อนนำไปทำการวัดด้วย spectrophotometer
ตัวอย่างที่สองจะเป็นการวิเคราะห์ Vitamin B2 riboflavin
ด้วย Fluorescence Photometry (RF) ในอาหาร
Riboflavin เมื่อละลายน้ำจะให้สารเรื่องแสงสีเขียวซึ่งจะสามารถถูก
excitation และให้ fluorescent spectrum ตามภาพ
แต่ถ้าทำการละลาย Riboflavin ใน alkali solution พร้อมทั้งให้แสงในช่วง
ultraviolet สารละลายนี้จะเปลี่ยนเป็น Lumiflavin ซึ่งจะมีคุณสมบัติในการวัดด้วย
fluorescent ที่ดีขึ้นดังภาพ
การวิเคราะห์ Vitamin ด้วย HPLC ขึ้นอยู่กับชนิดของ Vitamin
สำหรับ Fat-soluble vitamin มักจะนิยมเลือก Reversed phase chromatography
ในการแยก แต่ในกรณีที่เป็นการแยกสารที่เป็น isomer หรือ homologs ก็มักจะใช้
absorption chromatography
ตัวอย่างของ Column ที่ใช้ในการแยก fat-soluble vitamin ได้แก่
-
Shim-pack CLC-ODS (M) (250mm x 4.6mm i.d.)
-
Inertsil ODS-3V (250mm x 4.6mm i.d.)
-
Shim-pack CLC-NH2 (150mm x 6.0mm i.d.)
|
Bara Scientific 
