วิธีการวิเคราะห์น้ำตาล
การวิเคราะห์ Saccharides นิยมทำการวัดด้วยเครื่อง UV และ HPLC
ขึ้นอยู่กับลักษณะของตัวอย่างและผลที่ต้องการจาการวิเคราะห์
ตัวอย่างการใช้ UV ในการวิเคราะห์ Saccharides
เช่นการวัด reducing sugar ด้วย Dinitrosalicylic colorimetric method
(DNS method)
ส่วน HPLC เหมาะสำหรับตัวอย่างที่เป็นสารผสมของ Saccharides หลายๆ
ชนิดและต้องการทราบชนิดและปริมาณของ Saccharides ที่ผสมกันอยู่ วิธีการวิเคราะห์ด้วย
HPLC มีให้เลือกด้วยกัน 3 mode
| 1. Size exclusion, Ligand exchange เหมาะกับการวิเคราะห์
Saccharides, sugar alcohols และ Polyhydric alcohols ที่มี molecular
weights ประมาณ 1000 หรือน้อยกว่าและสามารถแยกด้วย molecular weight |
| Stationary phase: |
Sulfonated Polystyrene |
| ตัวอย่างเช่น |
Shim-pack SPR series
Shim-pack SRC series |
| Mobile phase: |
Water |
| 2. Normal phase (partition) เหมาะกับการแยกสารเป็นชนิดๆ
สำหรับ Saccharides, sugar alcohol และ Polyhydric alcohols |
| Stationary phase: |
mino base Chemical Bonded Polymer |
| ตัวอย่างเช่น |
Shim-pack CLC-NH2, Inertsil-NH2 |
| Mobile phase: |
Acetonitrile/ Water |
| 3. Anion exchange เหมาะกับการแยกสารตัวอย่างที่มีองค์ประกอบเป็นพวก
reducing sugar |
| Stationary phase: |
Anion Exchange Porous Polymers |
| ตัวอย่างเช่น |
Shim-pack ISA-07 |
| Mobile phase: |
Borate Buffer |
การเลือกว่าจะใช้ Mode ใดในการวิเคราะห์ให้พิจารณาจากชนิดของตัวอย่างเพื่อให้ได้การแยกที่ดีที่สุด
เช่นเดียวกับการเลือก detector ที่จะต้องเลือกให้เหมาะสมกับลักษณะของตัวอย่าง
โดยปกติการวิเคราะห์ Saccharides ด้วย HPLC มักจะใช้ Refractive index
detector ในการวัด แต่ในบางครั้งเช่นการวิเคราะห์ Saccharides ใน Biological
sample หรือ Natural products ต้องการวัดที่เฉพาะ และ sensitivity
ที่สูงกว่าเพราะตัวอย่างมักจะมี impurities จำนวนมากและปริมาณของ Saccharides
ที่ต้องการวิเคราะห์ก็มักจะมีปริมาณต่ำ เพื่อเพิ่ม sensitivity ได้มีการออกแบบ
post-column derivatization method ตัวอย่างเช่น Shimadzu HPLC reducing
sugar system เป็นระบบ post-column fluorometric detection method
ซึ่งใช้ L-Arginine เป็น Derivatizing reagent ซึ่งจะทำปฏิกิริยากับ
sugars ที่ 150 องศาC ที่ reaction coil โดยระบบจะมีองค์ประกอบตามภาพ
ระบบนี้สามารถใช้ได้กับการแยกทั้ง 3 modes ของ HPLC แต่ anion exchange
method เป็นวิธีการแยกที่มีประสิทธิภาพมากที่สุดในการแยก isomers ของ
monosaccharides ระบบที่ออกแบบนี้นอกจากจะให้ sensitivity ที่ดีมากกับ
reducing sugar แต่ก็สามารถวัด non-reducing sugar อย่าง sucrose และ
raffinose แต่ sensitivity จะต่ำกว่าพวก reducing sugar แต่ sensitivity
ก็ยังคงสูงกว่าการวัดด้วย refractive index detector
|
Bara Scientific 
