ทางเลือกสำหรับการวิเคราะห์ Fatty acid
การวิเคราะห์ Fatty acid ด้วย HPLC
Fatty acid สามารถทำการวิเคราะห์ด้วย HPLC โดยไม่ต้องผ่านขบวนการทำปฏิกิริยาใดๆ ด้วย UV-absorption ของ Carboxylic acid groups ที่ 210nm แต่ถ้าตัวอย่างมีปริมาณ Fatty acid น้อยหรือในตัวอย่างมีสารอื่นๆ ปนเปื้อนอยู่มากอย่างตัวอย่างที่ได้มาจากอุตสาหกรรมอาหาร จะทำให้การวัดทำได้ยาก เพื่อเพิ่มความเฉพาะเจาะจงในการวัดหรือเพิ่ม sensitivity ก่อนทำการวิเคราะห์ให้ทำ label ด้วย labeling reagent อย่างเช่น 9-Anthryl-diazomethane (ADAM) โดยสารตัวนี้จะเข้าทำปฏิกิริยากับ carboxylic group ตามสมการด้านล่างแล้วทำการวัด fatty acid ที่ติด label นี้ด้วย fluorescent detector
ตัวอย่างของ Analytical condition
| Column: |
Shim-pack CLC-ODS or Inertsil ODS-3 |
| Mobile phase: |
Acetonitrile/ water = 95/5 (v/v) |
| Flow rate: |
1.0 ml/min |
| Temperature: |
45 C |
| Detection: |
Fluorescent detector (Ex365nm Em415nm) |
นอกจากนี้ยังสามารถใช้ ODS column ในการแยก Triglycerides และวัดด้วย UV detector ที่ 200~210 nm. หรือ Refractive index detector ก็ได้โดยใช้ Acetonitrile/ Tetrahydrofuran เป็น mobile phase
การวิเคราะห์ Fatty acid ด้วย GC และ GCMS
Fatty acid ที่ปรากฏอยู่ใน Food products จำนวนมากจะนิยมใช้ GC (FID) หรือ GCMS เป็นทางเลือกในการวิเคราะห์ โดย Fatty acid จะต้องผ่านการทำ derivatization ก่อนจะนำมาทำการวัด สำหรับ GCMS จุดประสงค์ของขั้นตอนของการทำ Derivatization ประกอบด้วย
-
ลดความเป็น Polarity ของสาร
-
ลดค่า Boiling point
-
เพิ่ม molecular ion peak และ intensity
ในกรณีของ Fatty acid เราจะใช้ Methyl esterization หรือ trimethylsilylation แต่ methyl esterization จะเป็นที่นิยมมากกว่า
สำหรับ Saturated fatty acid methyl ester สามารถเห็น molecular ion จาก EI mass spectrum เพื่อใช้ในการกำหนด molecular weight ของสารหรือนับจำนวน carbon ได้ แต่ในกรณีที่มีปริมาณ unsaturation เพิ่มขึ้นจะไม่สามารถเห็น molecular ion หรือนับจำนวน carbon ได้ในกรณีนี้ควรเปลี่ยนมาใช้ CI mass spectrum
สำหรับ Column ที่ใช้ในการวิเคราะห์ควรจะเป็น slightly polar column อย่าง DB-1 หรือ polar column อย่าง DB-WAX ซึ่งจะให้ peak ของ saturated และ unsaturated ตามลำดับ ในขณะที่ slightly polar column จะให้ลำดับที่กลับกัน
การเตรียม Fatty acid สำหรับการวิเคราะห์ด้วย GC และ GCMS สามารถทำได้หลายวิธี
การวิเคราะห์ Triglycerides ด้วย GC เนื่องจาก triglyceride เป็นสารที่มีจุดเดือดสูงและเป็นพวก strong absorption ทำให้ separation ทำได้ยาก ในกรณีนี้ให้ใช้ pack column สั้นๆ ที่ pack ด้วย packing ที่ทนความร้อนสูงและเมื่อเปรียบเทียบกับการใช้ Capillary column จะมีการเกิด absorb น้อยกว่าและให้ separation ที่ดีกว่าแต่ capillary column ต้องเป็นประเภทที่ทนความร้อนได้สูงๆ อย่างเช่นพวก stainless steel capillary column หรือ aluminum coated และควรใช้ cold on-column injector. |
Bara Scientific 
